Развој на индиректен метод ELISA за откривање на свински синдром на акутна дијареа коронавирус IgG антитела врз основа на рекомбинантен протеин на шилеста

Синдром на свинска акутна дијареа Коронавирус (SADS-CoV) е новооткриен свински ентеричен патоген коронавирус кој може да предизвика водена дијареа кај новородените прасиња и да предизвика значителни економски загуби на свинската индустрија.Во моментов, не постои соодветен серолошки метод за да се оцени ефикасноста на SADS-CoV инфекцијата и вакцината, така што постои итна потреба да се користи ефективна ензимска имуносорбентна анализа (ELISA) за да се надомести овој недостаток.Овде, конструиран е рекомбинантен плазмид кој изразува SADS-CoV шилец (S) протеин, споен со човечки IgG Fc домен за да произведе рекомбинантен бакуловирус и изразен во HEK 293F клетки.Протеинот S-Fc се прочистува со протеин G смола и ја задржува реактивноста со анти-човечки Fc и анти-SADS-CoV антитела.Потоа се користеше S-Fc протеинот за да се развие индиректна ELISA (S-iELISA) и да се оптимизираат условите за реакција на S-iELISA.Како резултат на тоа, со анализа на вредноста на OD450nm на 40 SADS-CoV негативни серуми потврдени со имунофлуоресценциска анализа (IFA) и Western blotting, граничната вредност беше утврдена на 0,3711.Коефициентот на варијација (CV) на 6 SADS-CoV позитивни серуми во и помеѓу испитувањата на S-iELISA беа сите помали од 10%.Тестот за вкрстена реактивност покажа дека S-iELISA нема вкрстена реактивност со други серуми на свински вируси.Дополнително, врз основа на детекција на 111 клинички серумски примероци, вкупната стапка на коинциденција на IFA и S-iELISA беше 97,3%.Тестот за неутрализација на вирусот со 7 различни OD450nm вредности на серумот покажа дека вредноста на OD450nm откриена од S-iELISA била позитивна корелација со тестот за неутрализација на вирусот.Конечно, S-iELISA беше изведен на 300 примероци од серум на свињарска фарма.Комерцијалните комплети на други свински ентеровируси покажаа дека IgG позитивните стапки на SADS-CoV, TGEV, PDCoV и PEDV беа 81,7%, 54% и 65,3%, соодветно., 6%, соодветно.Резултатите покажуваат дека S-iELISA е специфичен, чувствителен и може да се репродуцира и може да се користи за откривање на инфекција со SADS-CoV во свинската индустрија.Оваа статија е заштитена со авторски права.Сите права се задржани.